IPTG ili izopropil β-D-1-tiogalaktopiranozid dobro je poznat reagens u području molekularne biologije. Kao anIPTG reagensDobavljač, vidio sam iz prve ruke kako ova mala kemikalija može imati veliki utjecaj na istraživanje proteina, posebno kada je u pitanju post-translacijska modifikacija proteina.
IPTG reagens
Šifra proizvoda: BM-2-5-091
Engleski naziv: IPTG
CAS BR.: 367-93-1
MF: C9H18O5S
MW: 238,3
EINECS: 206-703-0
Proizvođač: BLOOM TECH Wuxi Factory
Analiza: HPLC, LC-MS, HNMR
Glavno tržište: SAD, Australija, Brazil, Japan, Njemačka, Indonezija, UK, Novi Zeland, Kanada itd.
Tehnološka podrška: R&D Dept.-4
Mi pružamoIPTG reagens, pogledajte sljedeću web stranicu za detaljne specifikacije i informacije o proizvodu.
Proizvod:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-reagent-cas-367-93-1.html
Što je naknadna prijevodna izmjena?
Prije nego što zaronimo u to kako IPTG utječe na posttranslacijsku modifikaciju, prođimo na brzinu o tome što je posttranslacijska modifikacija. Nakon što se protein sintetizira iz mRNA u procesu koji se naziva translacija, on često prolazi različite kemijske modifikacije. Te modifikacije mogu promijeniti strukturu, funkciju, stabilnost i sposobnost interakcije proteina s drugim molekulama. Neke uobičajene posttranslacijske modifikacije uključuju fosforilaciju, glikozilaciju, acetilaciju i ubikvitinaciju.
Kako IPTG djeluje na ekspresiju proteina
IPTG se široko koristi kao induktor ekspresije rekombinantnih proteina u bakterijama, posebno u E. coli. U E. coli, lac operon je skup gena koji su uključeni u metabolizam laktoze. Normalno, lac operon je potisnut, ali kada se IPTG doda kulturi, on se veže na lac represorski protein, uzrokujući konformacijsku promjenu. Ova promjena oslobađa represor iz operatorske regije lac operona, dopuštajući RNA polimerazi da veže i transkribira gene nizvodno, uključujući gen koji kodira rekombinantni protein koji nas zanima.
Utjecaj na posttranslacijske izmjene
Fosforilacija
Fosforilacija je jedna od najvažnijih posttranslacijskih modifikacija. Može regulirati aktivnost proteina, lokalizaciju i interakcije. Kada se IPTG koristi za induciranje ekspresije proteina, može neizravno utjecati na fosforilaciju. Na primjer, prekomjerna ekspresija proteina inducirana IPTG-om može dovesti do neravnoteže u staničnom sustavu kinaza-fosfataza. Neke kinaze mogu biti preopterećene velikom količinom supstrata (novosintetiziranog proteina), što dovodi do premale ili prekomjerne fosforilacije.
Štoviše, povećana metabolička aktivnost u stanici zbog prekomjerne ekspresije proteina može promijeniti dostupnost ATP-a, koji je donor fosfata za reakcije fosforilacije. To može dodatno poremetiti normalne obrasce fosforilacije eksprimiranog proteina.
Glikozilacija
Glikozilacija je dodavanje ugljikohidratnih skupina proteinima. Bakterije poput E. coli, koje se obično koriste za ekspresiju proteina s IPTG, nemaju isti mehanizam glikozilacije kao eukariotske stanice.
Međutim, prisutnost ekspresije proteina izazvane IPTG-om još uvijek može imati utjecaja. Povećana potražnja za staničnim resursima tijekom prekomjerne ekspresije proteina može dovesti do manjka nukleotidnih šećera, koji su građevni blokovi za glikozilaciju. To može rezultirati nepotpunim ili abnormalnim obrascima glikozilacije ako protein ima potencijalna mjesta glikozilacije.
Acetilacija
Acetilacija je još jedna važna post-translacijska modifikacija koja može utjecati na stabilnost i funkciju proteina. IPTG - inducirana ekspresija proteina može promijeniti unutarstaničnu okolinu. Na primjer, povećana proizvodnja proteina može promijeniti razine acetil-CoA, koji je acetil donor za reakcije acetilacije. Ako su razine acetil-CoA oslabljene zbog visoke ekspresije proteina, to može dovesti do smanjene acetilacije eksprimiranog proteina.
Studije slučaja
Pogledajmo neke primjere iz stvarnog svijeta. U studiji su istraživači pokušavali eksprimirati rekombinantni ljudski protein u E. coli koristeći IPTG. Primijetili su da protein ima različite obrasce fosforilacije u usporedbi s prirodnim proteinom u ljudskim stanicama. Prekomjerna ekspresija izazvana IPTG-om dovela je do abnormalnog stanja fosforilacije, što je utjecalo na aktivnost proteina.
Drugi primjer je povezan s glikozilacijom. Kada je glikoprotein eksprimiran u E. coli s IPTG-om, nedostatak odgovarajućih strojeva za glikozilaciju u E. coli u kombinaciji s ograničenjima resursa uzrokovanim prekomjernom ekspresijom izazvanom IPTG-om rezultiralo je nefunkcionalnim proteinom. Abnormalni uzorak glikozilacije spriječio je protein da se pravilno savije i stupi u interakciju sa svojim ciljnim molekulama.
Uloga IPTG-a u istraživanju i industriji
IPTG je ključni alat u istraživanju i biotehnološkoj industriji. U istraživanju omogućuje znanstvenicima da proučavaju funkciju proteina tako što ih prekomjerno kontrolirano izražavaju. U biotehnološkoj industriji koristi se za proizvodnju velikih razmjera rekombinantnih proteina u terapeutske i dijagnostičke svrhe.
Međutim, treba pažljivo razmotriti utjecaj IPTG-a na posttranslacijsku modifikaciju. Na primjer, ako je protein namijenjen terapijskoj upotrebi, sve abnormalne post-translacijske modifikacije mogu utjecati na njegovu sigurnost i učinkovitost. Stoga istraživači i stručnjaci u industriji moraju optimizirati uvjete indukcije IPTG-a kako bi te učinke sveli na minimum.
Ostali povezani reagensi
Kao dobavljač IPTG reagensa, također želim spomenuti neke druge reagense koji su povezani s istraživanjem proteina. Moglo bi vas zanimatiAmitriptilin hidroklorid u prahu CAS 549 - 18 - 8, koji se koristi u nekim istraživačkim studijama vezanim uz interakcije proteina i malih molekula.Cilengitidje još jedan zanimljiv reagens koji se može koristiti u proučavanju interakcija proteina i stanica. IProtoporfirin IX CAS 553 - 12 - 8ima primjenu u interakcijama proteina i hema.
Zaključak i poziv na akciju
Zaključno, IPTG je snažan reagens koji ima značajan utjecaj na posttranslacijsku modifikaciju proteina. Iako je vrijedan alat za ekspresiju proteina, moramo biti svjesni njegovih potencijalnih učinaka na posttranslacijsku modifikaciju. Bilo da ste istraživač u laboratoriju ili profesionalac u biotehnološkoj industriji, razumijevanje ovih učinaka ključno je za uspješno istraživanje i proizvodnju proteina.
Ako ste zainteresirani za kupnju IPTG reagensa visoke kvalitete ili bilo kojeg drugog srodnog reagensa koji sam spomenuo, slobodno nam se obratite. Tu smo da vam pružimo najbolje proizvode i podršku za vaše potrebe istraživanja proteina.
Reference
Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. i Walter, P. (2002.). Molekularna biologija stanice. Znanost o vijencu.
Sambrook, J. i Russell, DW (2001). Molekularno kloniranje: Laboratorijski priručnik. Cold Spring Harbor Laboratory Press.