Hej, kolege entuzijasti proteina! Danas sam oduševljen zaroniti u vruću temu u svijetu proizvodnje rekombinantnih proteina: kako se količina IPTG prahmože u potpunosti utjecati na prinos tih oh - tako - vrijednih rekombinantnih proteina. Kao dobavljač IPTG praha, vidio sam iz prve ruke kako ovaj mali prah može poboljšati ili uništiti vašu igru proizvodnje proteina.
Iptg prah
Šifra proizvoda: BM-2-5-133
Naziv: Iptg
CAS br.: 367-93-1
MF: C9H18O5S
MW: 238,3
EINECS br.: 206-703-0
Proizvođač: BLOOM TECH Wuxi Factory
Analiza: HPLC, LC-MS, HNMR
Glavno tržište: SAD, Australija, Brazil, Japan, Njemačka, Indonezija, UK, Novi Zeland, Kanada itd.
Tehnološka podrška: R&D Dept.-4
Mi pružamoIPTG prah, pogledajte sljedeću web stranicu za detaljne specifikacije i informacije o proizvodu.
Proizvod:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-powder-cas-367-93-1.html
Prvo, idemo na brzinu proći kroz ono što je IPTG. IPTG, ili izopropil β - D - 1 - tiogalaktopiranozid, dobro je poznat kemijski spoj koji se koristi kao induktor u proizvodnji rekombinantnih proteina. Oponaša prirodni induktor alolaktozu i veže se na lac represor, koji zatim omogućuje transkripciju ciljnog gena. Jednostavnije rečeno, to je poput ključa koji otključava vrata vašim bakterijama da počnu proizvoditi rekombinantni protein koji tražite.
Dakle, razgovarajmo o odnosu između količine IPTG praha i prinosa rekombinantnog proteina. Općenito, možda mislite da više IPTG znači više proteina. Ali nije tako jednostavno. To je poput pečenja kolača. Dodavanje previše šećera ne čini kolač uvijek boljim; zapravo, može ga uništiti.
Niske razine IPTG
Kada koristite malu količinu IPTG praha, indukcija proizvodnje rekombinantnog proteina je malo sporija. Lac represor nije potpuno inhibiran, tako da se samo mali broj gena prepisuje u bilo kojem trenutku. To može rezultirati manjim ukupnim prinosom rekombinantnog proteina. Ali postoje neke pogodnosti. Kao prvo, bakterije su manje pod stresom. Zamislite to kao da bakterije imaju lako radno okruženje. Oni mogu polako i postojano proizvoditi protein, a često je vjerojatnije da će protein biti u ispravnom, presavijenom obliku. Ovo je jako važno ako tražite funkcionalan protein.
Međutim, nedostatak je što proces proizvodnje traje duže. Ako ste u žurbi nabaviti veliku količinu rekombinantnog proteina, indukcija IPTG niske razine možda nije vaš najbolji izbor. Na primjer, ako radite na vremenski osjetljivom istraživačkom projektu gdje trebate dovršiti više rundi eksperimenata s pristojnom količinom proteina, dugo čekanje da se protein akumulira jednostavno neće pomoći.
Visoke razine IPTG-a
S druge strane, korištenje velike količine IPTG-a može vam dati brzi početak proizvodnje proteina. Lac represor je potpuno nadjačan, a veliki broj gena se prepisuje odjednom. To često dovodi do brzog povećanja proizvodnje rekombinantnih proteina, a vi možete dobiti veći prinos u kraćem razdoblju. To je kao da bakteriji date jak udarac u gaće da počne raditi prekovremeno.
Ali ovdje je caka. Visoke razine IPTG mogu biti toksične za bakterije. To ih može toliko stresirati da počnu odumirati ili postati manje učinkoviti u proizvodnji proteina. Također, protein se možda neće ispravno savijati. Kada su bakterije bombardirane velikom potražnjom za proizvodnjom proteina, možda neće imati dovoljno vremena ili resursa da ga ispravno savijaju. To može rezultirati stvaranjem inkluzijskih tijela,
koji su agregati pogrešno savijenih proteina. Borba s tim inkluzijskim tjelešcima je mučna jer tada morate proći kroz složen proces solubilizacije i ponovnog savijanja proteina.
Pronalaženje Sweet Spota
Dakle, kako pronaći pravu količinu IPTG praha za korištenje? Pa, ovisi o hrpi faktora. Vrsta bakterije koju koristite je velika. Različiti sojevi bakterija imaju različitu osjetljivost na IPTG. Neki mogu podnijeti veću dozu bez previše stresa, dok su drugi osjetljiviji.
Uvjeti rasta bakterija također su važni. Stvari poput temperature, vrste medija i razine kisika mogu utjecati na to kako bakterije reagiraju na IPTG. Na primjer, ako bakterije rastu u bogatom mediju, mogle bi biti otpornije na učinke IPTG-a visoke razine.
Još jedna stvar koju treba uzeti u obzir je priroda samog rekombinantnog proteina. Ako je protein vrlo složen ili ima mnogo disulfidnih veza, možda ćete htjeti koristiti manju količinu IPTG-a kako biste bakterijama dali više vremena da ga ispravno savijaju.
Kao dobavljača IPTG praha, često me traže preporuke o količini koju treba koristiti. A moj odgovor je uvijek: "Ovisi." Ali mogu ponuditi neke općenite smjernice. Dobro mjesto za početak je s rasponom koncentracija od 0,1 - 1 mM IPTG. Zatim možete napraviti neke male eksperimente da vidite kako vaš specifični sustav reagira. Pokušajte s različitim koncentracijama unutar ovog raspona i izmjerite prinos i kvalitetu proteina.
Sada, pogledajmo neke primjere iz stvarnog svijeta. U istraživačkom projektu u kojem su znanstvenici pokušavali proizvesti određeni enzim, u početku su koristili nisku koncentraciju IPTG (0,1 mM). Prinos proteina bio je relativno nizak, ali je enzim bio vrlo aktivan, što ukazuje da je bio dobro - presavijen. Kada su povećali koncentraciju IPTG na 1 mM, prinos je porastao, ali se aktivnost enzima smanjila. Daljnja analiza je pokazala da je bilo više inkluzijskih tijela u višoj koncentraciji.
U drugom slučaju, biotehnološka tvrtka proizvodila je terapijski protein. Otkrili su da su pažljivim optimiziranjem koncentracije IPTG-a na temelju faze rasta bakterije uspjeli postići visok prinos pravilno savijenog proteina. To ne samo da im je uštedjelo vrijeme, već je i smanjilo troškove daljnje obrade.
Ako ste na tržištu za visokokvalitetnim IPTG prahom, mi ćemo vas pokriti. Naš IPTG prah je čist i pouzdan, osiguravajući dosljedne rezultate u vašoj proizvodnji rekombinantnih proteina. I dok ste ovdje, pogledajte neke od naših drugih sjajnih proizvoda. Možete pronaćiČisti sevofluran CAS 28523 - 86 - 6,Apigenin u prahu CAS 520 - 36 - 5, iElagična kiselina u prahu CAS 476 - 66 - 4na našoj web stranici.
Ako imate bilo kakvih pitanja o količini IPTG praha koju ćete koristiti za svoj specifični projekt ili ako ste zainteresirani za kupnju naših proizvoda, slobodno nam se obratite. Uvijek smo tu da vam pomognemo optimizirati proizvodnju rekombinantnih proteina. Radimo zajedno kako bismo dobili najbolje rezultate za vaše potrebe istraživanja ili proizvodnje!
Reference
- Sambrook, J. i Russell, DW (2001). Molekularno kloniranje: Laboratorijski priručnik. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
- Studier, FW, i Moffatt, BA (1986). Upotreba RNA polimeraze bakteriofaga T7 za usmjeravanje selektivne ekspresije visoke razine kloniranih gena. Časopis za molekularnu biologiju, 189(1), 113 - 130.
- Baneyx, F. (1999). Ekspresija rekombinantnog proteina u Escherichia coli. Biotehnologija i primijenjena biokemija, 30 (Pt 2), 101 - 106.