Sephadex G75je vrsta punila gel filtra s dobrim performansama. Priprema se umrežavanjem dekstrana i epiklorohidrina. To je gel u obliku perle s velikom količinom hidroksilnih skupina, što je lako nabreknuti u otopinama vode i elektrolita. Maksimalna granica isključenja ovog spoja je 80000, a specifični stupanj oteklina ovisi o količini suhe smole i radnim uvjetima. Na primjer, pod određenim uvjetima, stupanj suhe smole može biti 519 ml/g. Kada je raspon radnog pH 6,210 (5,210 za neke proizvode), spoj može ostati stabilan. Preporučuje se pohranjivanje na sobnoj temperaturi, hladno i dalje od svjetla u temperaturnom rasponu od 430 stupnjeva (ili 425 stupnjeva) kako bi se održala njegova performanse i stabilnost. Ova tvar je posebno prikladna za velike biomolekule s molekularnom masom većom od 80000. Uglavnom se koristi za desalinizaciju i zamjenu pufera tako velikih biomolekula. Kroz jedan - korak koraka moguće je brzo desalizirati, ukloniti zagađivače i prenijeti molekule u novo rješenje međuspremnika. Pored desalinizacije i zamjene pufera, Sephadex G-75 je također prikladan za proces pročišćavanja velikih biomolekula.
 |
 |
Sephadex G75je dekstran gel, koji se uglavnom koristi za tehnologiju odvajanja i pročišćavanja u biokemiji i molekularnoj biologiji. Glavne uporabe ove tvari su sljedeće:
U procesu desalinizacije može učinkovito ukloniti soli (obično anorganske soli male molekule) iz bioloških molekularnih otopina. Prednost ove tvari je u tome što je lako raditi, brzo i može postići učinkovitu desalinizaciju bez promjene aktivnosti biomolekula. Osim toga, zbog izvrsne kemijske stabilnosti i biokompatibilnosti, pogodan je za obradu desalinizacije različitih biomolekula, uključujući proteine, peptide, nukleinske kiseline, itd. U praktičnim primjenama, desaliziranje gela obično se kombinira s drugim tehnologijama pročišćavanja, poput ionske izmjene, afiniteta i itd., U postizanje opsežnog pročišćavanja.
Ova tvar ima širok raspon primjene u zamjeni pufera, posebno u područjima biokemije i molekularne biologije. Na primjer, u procesu pročišćavanja proteina ponekad je potrebno prenijeti proteine iz jednog puferskog sustava u drugi puferski sustav koji je prikladniji za njihovu stabilnost i aktivnost. I ta tvar može učinkovito postići taj cilj; U procesu ekstrakcije nukleinske kiseline također je potrebno odvojiti nukleinsku kiselinu od otopine koja sadrži nečistoće i soli i prenijeti je u novi pufer za naknadne operacije. Također se primjenjuje na ovaj scenarij; Tijekom stanične kulture ponekad je potrebno zamijeniti kulturni medij ili pufer za održavanje rasta i aktivnosti stanica. Može se koristiti za uklanjanje štetnih tvari iz stare kulture medija ili pufera i unošenje novih kultura ili međuspremnika.
Molekularno prosijavanje
U procesima istraživanja i pripreme proteina obično je potrebno odvojiti ciljne proteine od složenih smjesa. Može odvojiti proteine na temelju njihove veličine, postižući na taj način pročišćavanje proteina. Podešavanjem uvjeta elucije, poput čvrstoće iona i pH vrijednosti eluenta, efikasnost odvajanja proteina može se dodatno optimizirati. Pored proteina i nukleinskih kiselina, može se koristiti i za odvajanje i pročišćavanje drugih biomolekula, poput polisaharida, enzima, antitijela itd. Brzina kretanja ovih biomakromolekula u gelu ovisi o njihovoj veličini i obliku kako bi se postigla učinkovito odvajanje. Iako se ta tvar ne koristi izravno kao alat za određivanje molekularne mase, ona može poslužiti kao pomoćni alat u određivanju molekularne mase.
U procesu pročišćavanja proteina obično je potrebno ukloniti nečistoće male molekule poput soli, metabolita malih molekula, nevezanih liganda itd. Iz otopine proteina. Ova tvar može učinkovito ukloniti ove nečistoće male molekule iz proteinskih otopina, poboljšavajući čistoću proteina. Njegov efekt molekularnog sita omogućava učinkovito uklanjanje ovih nečistoća male molekule, što rezultira čistijim nukleinskim kiselinama. Enzimski pripravci obično sadrže nečistoće male molekule poput nereagiranih supstrata, inhibitora, metabolita itd. Ove nečistoće mogu utjecati na aktivnost i stabilnost enzima. Kroz gel filtraciju materijala, ove male molekularne nečistoće mogu se učinkovito ukloniti i čistoća pripreme enzima može se poboljšati. Pored proteina i nukleinskih kiselina,
Simulirati transdukciju međućelijskog signala
Transdukcija među staničnom signalu je temeljni regulatorni mehanizam životnih aktivnosti, koji uključuje složene procese poput prepoznavanja stanica, pretvorbe signala i fiziološkog odgovora. Tradicionalna istraživanja često se oslanjaju na modele živih ćelija, ali postoje ograničenja kao što su složene signalne mreže i višestruki ometajući faktori.Sephadex G75je klasični medij za filtraciju dekstrana. Njegova porozna struktura i efekt molekularnog sita pružaju jedinstveni fizički model za simulaciju transdukcije međućelijskog signala.
Fizički model za simulaciju transdukcije međućelijskog signala pomoću Sephadex G-75
Simulacija međućelijskih jaza spoja
Jap spoj je hidrofilni kanal formiran između susjednih stanica kroz veznik, omogućavajući slobodnu razmjenu malih molekula s molekulskom masom<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Formiranje gradijenta molekula signala: Različite koncentracije molekula signala (kao što su CAMP, CA ²+) učitavaju se u stupac gela. Razlika brzine difuzije malih molekula u pora gela može se primijetiti kroz efekt molekularnog sita, a gradijentni prijenos kemijskih signala između stanica može se simulirati.
Sinergistička simulacija odgovora: dvije interaktivne molekule (poput liganda i receptora) učitavaju se na oba kraja gela stupaca, a njihova kinetika vezanja analizira se kroz vremensku razliku elucije kako bi simulirala proces molekularnog prepoznavanja u izravnoj kontaktnoj komunikaciji između stanica.
Simulacija molekularnog kontakta na površini membrane
Komunikacija između površinskih molekula membrane oslanja se na specifične interakcije površinskih proteina stanične membrane. Sephadex G-75 može simulirati ovaj postupak funkcionalnom modifikacijom:
Eksperiment vezanja receptora liganda: Biotinilirani proteini receptora (poput EGFR -a) fiksirani su na površini čestica gela, fluorescentni označeni ligandi (poput EGF) zabilježeni su kroz sustav biotina streptavidina, a intenzitet veznog signala se nadgleda s afinitetom fluorescencije.
Analiza konkurentnih veza: Unaprijed učitavanje kompleksa receptora liganda u stupcu gela, dodajte konkurentne inhibitore različitih koncentracija (poput anti -EGFR antitijela), izračunajte konstantu inhibicije (KI) kroz vršni pomak elucije i simulirajte interventni učinak lijekova na putovima signala staničnih signala.
Simulacija prijenosa kemijskog signala
Transdukcija kemijskog signala oslanja se na difuziju molekula kemijske signalizacije (poput hormona i citokina) koje izlučuju stanice kroz tjelesne tekućine ili izvanstanične matrice u ciljane stanice. Sephadex G - 75 može konstruirati trodimenzionalni difuzijski model:
Simulacija parakrinskog sustava: Sekretorne stanice (poput makrofaga) i ciljne stanice (poput T stanica) kapsulirane su u gel mikrosferi, a aktivacijski status ciljnih stanica (poput ekspresije CD69) primjećuje se putem CO kulture kako bi se simulirali lokalni učinak parakrinskih signala.
Endokrini prijenos signala: Fluorescentni označeni hormoni (poput inzulina) učitavaju se u stupac gela, a njihova interakcija s porama gela analizira se kroz vrijeme elucije, a polovica - vijek hormona u cirkulaciji krvi i raspodjele ciljanih organa predviđa se kombiniranim matematičkim modelima.
Primjena slučaja Sephadex G-75 u istraživanju signalizacije stanica
Istraživanje transdukcije signala crvenih krvnih stanica i funkcije integrina
Integrin receptora za adheziju trombocita iib 3 je najzastupljeniji glikoprotein na površini membrane trombocita i ključan je za stvaranje hemostaze i tromba. Proučite upotrebu Sephadex G-75 za simulaciju interakcije između trombocita i subendotelnog kolagena:
Model aktivacije integrina: Pročišćeni integrin IIB 3 bio je fiksiran na površini čestica gela, a topivi fibrinogen (FG) dodan je kao ligand. Kinetika vezanja otkrivena je površinskom plazmonskom rezonancom (SPR). Utvrđeno je da je afinitet integrina na FG nakon aktivacije značajno poboljšan (KD je smanjen od μm u NM).
Protering lijekova protiv tlabota: Preload Integrin FG kompleks u stupcu gela, dodajte antiagregatne lijekove različitih koncentracija (poput tirofibana), izračunajte brzinu inhibicije lijekova na aktivnost integrina pomoću maksimalnog pomaka elucije i pružaju visoku - probirnu platformu za razvoj novih antithrombrotskih lijekova.
Regulacija signalnih putova povezanih s tumorima
Stanice tumora promiču proliferaciju i metastaze pomoću abnormalne aktivacije signalnih putova poput MAPK i PI3K/AKT. Sephadex G-75 može se koristiti za izoliranje i pročišćavanje ključnih proteina u signalnim putovima:
Istraživanje EGFR signalnog puta: EGFR protein je pročišćen sephadex g-75 gel filtracijom, a njegov status fosforilacije analiziran je masenom spektrometrijom. Utvrđeno je da je razina fosforilacije na lokacijama EGFR -a Y1068 i Y1086 značajno povećana nakon EGF stimulacije, koja je aktivirala signale nizvodno ERK1/2 i Akt.
Analiza mehanizma otpornosti na lijekove: U lijeku - rezistentne stanice karcinoma želuca (SGC7901/VCR), protein UHRF1 je izoliran i pročišćen Sephadex G-75, a utvrđeno je da njegova prekomjerna ekspresija može inhibirati aktivaciju apoptoze (kao što je Chemy-AsPase-3).
Signalizacija imunoloških stanica i regulacija polisaharida
Crvene alge polisaharidi (BFP) poboljšavaju imunološki odgovor aktiviranjem NF - κ B i MAPK signalnih putova u makrofazima. Istraživanje razdvajanja i pročišćavanja BFP-a i njegovih komponenti (F1, F2, F3) pomoću Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% je dobiveno Filtracijom GEL GEL-a Sephadex u kombinaciji s DEAE celulozom 52 ionska kromatografija iona, a njihova molekularna težina bila je 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa i 45 kDa.
Aktivacija signala: U modelu Macrofaga RAW264.7, BFP i njegove komponente mogu značajno inducirati izlučivanje NO i TNF -, a njegov mehanizam uključuje NF - κ B nuklearnu translokaciju i fosforilaciju JNK, ERK i P38 MARK. Pročišćene komponente razdvojene Sephadex G - 75 pokazale su da F1 ima najjači efekt aktivacije na NF - κ B i MAPK puteve (povećavajući proizvodnju za 2,5 puta i TNF - izlučivanje za 3 puta).
Popularni tagovi: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, dobavljači, proizvođači, tvornica, veleprodaja, kupovina, cijena, skupno, na prodaju