Bremelanotid(veza:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/bremelanotide-powder-cas-189691-06-3.html) je sintetski polipeptidni hormon čija je struktura slična leptinu, tirozinu i kožnom melaninu koji prirodno postoje u ljudskom tijelu. Kao nova vrsta lijeka, Bremelanotide ima regulirajuću funkciju i često se koristi u liječenju erektilne disfunkcije i niskog libida. Scenariji korištenja u svakodnevnom životu postaju sve opsežniji. Uz njegovo dubinsko istraživanje, ljudi su otkrili mnoge vrste njegovih metoda sinteze, koje će biti analizirane jedna po jedna u nastavku.
1. Sintetizirano iz L-tirozina:
U originalnoj metodi sinteze, struktura Bremelanotida je dobivena deformiranjem L-tirozina. Prvo se L-tirozin pretvara u dipeptidil-L-tirozin (Boc-Tyr(OCO)2-OH) u prisutnosti fluorovodične kiseline, gdje Boc predstavlja sukcinimidometil (t-butoksikarbonil) skupinu. Zatim dodajte benzil alkohol (PhCH2OH), 1-(3-dietilaminopropoksi)-2-(2-metazolil)etan (EDC) i N-hidroksibutandiol u tetrahidrofuranu (THF) reagensima kao što je imid (HOBt) može kombinirati dipeptidil-L-tirozin s pseudopeptidom alaninom (Phe-Aib-Aib-Lys(Ac)-Gly-Lys(Ac)-Aib-Leu- NH2) je sintetiziran u Bremelanotid.
(1) Pretvorba L-tirozina u dipeptidil-L-tirozin:
Najprije otopite L-tirozin u vodi i dodajte odgovarajuću količinu fluorovodične kiseline. Obično je koncentracija L-tirozina 1 M, a količina fluorovodične kiseline 5-10%. Smjesa je ostavljena da stoji na 0-4 stupnjeva 1 sat i zatim je ugašena.
Zatim je dobiveni kompleks L-tirozin-fluorovodična kiselina dodan kap po kap tetrahidrofuranu. U isto vrijeme, tetrahidrofuranu je dodana odgovarajuća količina reakcijskih reagensa kao što su benzil alkohol, EDC i HOBt. Nakon stajanja 2 sata uz miješanje može se dobiti dipeptidil-L-tirozin (Boc-Tyr(OCO)2-OH).
(2) Reakcija dipeptidil-L-tirozina s pseudopeptidom alaninom:
Dobiveni dipeptidil-L-tirozin otopiti u N,N-dimetilformamidu (DMF) i dodati pseudopeptid alanin. Uvjeti reakcije uključuju temperaturu, vrijeme reakcije i koncentraciju reaktanata, itd. Ovi čimbenici će utjecati na prinos i čistoću proizvoda. Pri koncentraciji od 225 g/L, omjer Boc-Tyr(OCO)2-OH prema pseudopeptidu alaninu bio je 1:30.
Nakon miješanja i stajanja u -N,N-dimetilformamidu 24 sata, reakcijska otopina je izlivena u ledenu vodu i istaložena s kiselom otopinom aldehida. Rezultat je konačni proizvod Bremelanotida.
Metoda sinteze uglavnom ima sljedeće prednosti: visoku čistoću proizvoda i jednostavan proizvodni proces. Ali ova metoda ima i neke nedostatke, kao što su dugotrajnost, visoka cijena i tako dalje.
2. Sinteza čvrste faze:
Sinteza čvrste faze trenutno je jedna od najčešće korištenih sintetskih metoda za Bremelanotide, a također je i glavna sintetska metoda u području sinteze peptida. U metodama čvrste faze polipeptidni lanci se grade uzastopnim dodavanjem jedinica aminokiselina. Prvo se prva aminokiselinska jedinica modificira u sterički restriktivnu i nerazgradivu N-zaštitnu skupinu (kao što je Fmoc), koja se zatim veže na porozni medij. Zatim, uvođenjem zaštitne skupine akrilne kiseline, reakcijom aciliranja i drugim koracima, svaka jedinica aminokiseline se dodaje na porozni medij, te se postupno konstruira kompletan polipeptidni lanac. Konačno, u koracima uklanjanja N-zaštitne skupine, denitrifikacije, itd., može se pripremiti Bremelanotidni polipeptidni lanac sa specifičnom sekvencom.
Metoda sinteze čvrste faze ima uglavnom sljedeće prednosti: visoku učinkovitost i visoku stopu iskorištenja sirovina. Ali ova sintetička metoda ima i neke nedostatke, kao što su višestruki koraci sušenja i pranja koji su potrebni u proizvodnom procesu, a ti će koraci dovesti do pada kvalitete proizvoda.
3. Sinteza tekuće faze:
Sinteza tekuće faze još je jedna metoda sinteze Bremelanotida, koja se provodi kroz tekući reakcijski sustav. Glavni koraci metode sinteze uključuju ispitivanje sirovina, dizajn molekule lijeka, odabir puta sinteze, reakciju, pročišćavanje i slično. U usporedbi sa sintezom u čvrstoj fazi, metodom sinteze u tekućoj fazi može se dobiti Bremelanotid veće čistoće i biološke aktivnosti. U metodi sinteze tekuće faze, obično korišteni reakcijski reagensi su dihidroksietil merkaptan (EDT), etoksikarbonilirajuće sredstvo (EEDQ), tioacetil klorid, itd.
Metoda sinteze tekuće faze uglavnom ima sljedeće prednosti: jednostavan rad i visoku čistoću proizvoda. Međutim, ova metoda sinteze ima i neke nedostatke, kao što su dulje razdoblje sinteze i veća cijena.
4. Fizikalno-kemijska sinteza:
U metodi fizikalno-kemijske sinteze, Bremelanotid se sintetizira fizikalnim i kemijskim metodama. Ova metoda uglavnom ima dva različita pristupa: jedan je realizirati sintezu Bremelanotida kroz ponovljene operacije fazne transformacije kruto-tekuće; drugi je promicanje samosastavljanja i polimerizacije polipeptidnih lanaca putem fizičke i mehaničke kompresije, čime se sintetizira Bremelanotide.
Mehanizam reakcije:
Sinteza Bremelanotida je uglavnom pretvaranjem L-tirozina u L-fenolni acilat, zatim sintetiziranjem L-fenolnog acilata i pseudopeptida, i konačno dobivanjem proizvoda. Mehanizam reakcije je sljedeći:
(1) Pretvorba L-tirozina u L-fenol acilat:
L-tirozin reagira s natrijevim azidom u otopini THF i stvara L-fenol acilat. Natrijev azid će pretvoriti hidroksilnu skupinu u tirozinu u azidnu skupinu, a zatim će kiseli tretman pretvoriti azidnu skupinu u fenolni acilat.
(2) L-fenol acilat se pretvara u kiselinski klorid:
L-fenolni acilat reagira s acetil kloridom u THF da bi proizveo kiselinski klorid. Pet puta veća količina TBHS treba apsorbirati stvoreni HCl. Kiselinski kloridi su međuprodukti reakcije koji su potrebni za sljedeće reakcije.
(3) Sinteza kiselinskog klorida i pseudopeptida:
Intermedijarni kiselinski klorid reagira s pseudopeptidom u DMF-u i stvara polipeptidni lanac Bremelanotida. Ono što se događa u ovom koraku je reakcija kondenzacije anhidrida, u kojoj je HOBt katalizator.
(4) Pročišćavanje i analiza proizvoda:
Konačni proizvod također treba pročistiti i analizirati kako bi se osigurala čistoća i kvaliteta spoja.
Metoda fizikalno-kemijske sinteze uglavnom ima sljedeće prednosti: jednostavan rad i kratko razdoblje pripreme. Međutim, ova sintetička metoda ima i neke nedostatke, poput niske čistoće proizvoda i nedovoljne raznolikosti proizvoda.
Zaključno, metode sinteze Bremelanotida su raznolike i fleksibilne, a odabir ovisi o mnogim čimbenicima, kao što su uvjeti reakcije, cijena sinteze i vrijeme reakcije, itd. Bez obzira na korištenu metodu, stabilni reakcijski uvjeti i proizvodi visoke čistoće su ključ uspješne sinteze bremelanotida.