Retatrutide(veza:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) je kemijski sintetiziran dugodjelujući GLP{1}}R/GIPR/GCGR polipeptidni agonist, koji je namijenjen liječenju dijabetesa tipa 2 kod odraslih, regulaciji tjelesne težine i nealkoholnoj masnoj jetri/nealkoholnom steatohepatitisu. Indikacija za dijabetes tipa 2 kod odraslih za ovaj proizvod odobrena je za kliničku upotrebu 29. kolovoza 2023. Osim toga, zahtjev za kliničku registraciju indikacija za nealkoholnu masnu jetru/nealkoholni steatohepatitis je u završnoj fazi pregleda. U svijetu se razvija osam GLP-1R/GIPR/GCGR agonista, od kojih je Ritin Retatrutide najbrže napredovao i pokrenuo treću fazu kliničkog ispitivanja u lipnju ove godine. Istog mjeseca Rita je objavila da su podaci o drugoj fazi istraživanja retatrutida objavljeni na godišnjem sastanku ADA-e, pokazujući da je nakon 24 tjedna retatrutid (1 mg, 4 mg, 8 mg ili 12 mg) dosegao glavnu krajnju točku učinkovitosti. procjena za pretile ili pretile sudionike bez dijabetesa, s prosječnim gubitkom težine od 17,5%. Među sekundarnim krajnjim točkama, prosječan gubitak težine od 24,2% postignut je na kraju 48 tjedana liječenja. Također smo sintetizirali peptid u laboratoriju na temelju objavljene metode. Konkretna metoda sinteze bit će ukratko opisana, a konkretne korake možete nam poslati putem e-pošte.
Metoda 1:
Detaljni koraci za sintezu retarutida pomoću sinteze čvrstog stanja u laboratoriju su sljedeći:
Pripremite potrebne reagense i instrumente: uključujući aminokiseline, diklorometan, kalijev karbonat, etoksilirani silika gel, acetonitril, piridin, N-metilmorfolin, izvor diizopropitil klorida, trifluoroctenu kiselinu, DIPEA, Boc zaštićene aminokiseline i druge reagense, kao i magnetske mješalice , rotacijski isparivači i drugi instrumenti.
(1) Sinteza Boc zaštićenih aminokiselina: Otopite potrebne aminokiseline u diklormetanu, dodajte prah kalijevog karbonata, ravnomjerno promiješajte, dodajte etoksilirani silikagel, nastavite miješati, a zatim dodajte piridin i N-metilmorfolin da dobijete Boc zaštićene aminokiseline.
(2) Sinteza čvrste faze: Pomiješajte zajedno acetonitril, izvor diizopropilet klorida i trifluoroctenu kiselinu, ravnomjerno promiješajte, dodajte pripremljene Boc zaštićene aminokiseline i nastavite miješati kako biste dobili produkt sinteze čvrste faze.
(3) Grupa za uklanjanje zaštite: Otopite sintezu čvrste faze u diklorometanu, dodajte trifluoroctenu kiselinu, ravnomjerno promiješajte i zatim dodajte DIPEA. Nastavite miješati kako bi se dobila sinteza čvrste faze bez zaštite.
(4) Pročišćavanje: Otopiti sintezu čvrste faze bez zaštite u vodi, namjestiti pH na oko 9.0 s otopinom natrijevog hidroksida, zatim namjestiti pH na oko 5.0 s octenom kiselinom, i na kraju taloži čisti produkt eterom.
Metoda 2:
Detaljni koraci za sintezu retarutida pomoću sinteze tekuće faze u laboratoriju su sljedeći:
Pripremite potrebne reagense i instrumente: uključujući arginin, glicin, anhidrid octene kiseline, trietilamin, kalijev karbonat, diklorometan, metanol, piridin, N-metilmorfolin, anhidrid octene kiseline, natrijev acetat i druge reagense, kao i instrumente kao što su mješalice, lijevci za odvajanje, vakuumske pumpe, pećnice i kromatografske kolone.
(1) Otopiti arginin i glicin u odgovarajućoj količini diklormetana, dodati odgovarajuću količinu anhidrida octene kiseline i trietilamina i ravnomjerno promiješati uz mješalicu.
(2) Prebacite otopljenu smjesu u pećnicu i zagrijavajte je na 80 stupnjeva C 1 sat da se acetiliraju ostaci aminokiselina.
(3) Neutralizirajte izreagiranu otopinu prahom kalijevog karbonata kako biste neutralizirali octenu kiselinu u otopini da biste dobili natrijev acetat, a zatim ekstrahirajte stvoreni peptid diklormetanom.
(4) Isprati ekstrahiranu peptidnu otopinu metanolom i filtrirati vakuumskom pumpom da se dobije sirovi peptid.
(5) Otopiti sirovi peptid u odgovarajućoj količini piridina i N-metilmorfolina, dodati odgovarajuću količinu anhidrida octene kiseline i natrijevog acetata i ravnomjerno promiješati uz mješalicu.
(5) Filtrirajte izreagiranu otopinu vakuumskom pumpom, isperite filterski kolač metanolom, a zatim filtrirajte vakuumskom pumpom kako biste dobili konačni Restarutid.
Metoda 3:
Detaljni koraci za sintetiziranje retarutida pomoću kemijskih metoda u laboratoriju su sljedeći:
Pripremite potrebne reagense i instrumente: uključujući arginin, glicin, anhidrid octene kiseline, trietilamin, kalijev karbonat, diklorometan, metanol, piridin, N-metilmorfolin, anhidrid octene kiseline, natrijev acetat i druge reagense, kao i instrumente kao što su mješalice, lijevci za odvajanje, vakuumske pumpe, pećnice i kromatografske kolone.
(1) Otopiti arginin i glicin u odgovarajućoj količini diklormetana, dodati odgovarajuću količinu anhidrida octene kiseline i trietilamina i ravnomjerno promiješati uz mješalicu.
(2) Prebacite otopljenu smjesu u pećnicu i zagrijavajte je na 80 stupnjeva C 1 sat da se acetiliraju ostaci aminokiselina.
(3) Neutralizirajte izreagiranu otopinu prahom kalijevog karbonata kako biste neutralizirali octenu kiselinu u otopini da biste dobili natrijev acetat, a zatim ekstrahirajte stvoreni peptid diklormetanom.
(4) Isprati ekstrahiranu peptidnu otopinu metanolom i filtrirati vakuumskom pumpom da se dobije sirovi peptid.
(5) Otopiti sirovi peptid u odgovarajućoj količini piridina i N-metilmorfolina, dodati odgovarajuću količinu anhidrida octene kiseline i natrijevog acetata i ravnomjerno promiješati uz mješalicu.
(6) Filtrirajte izreagiranu otopinu vakuumskom pumpom, isperite filterski kolač metanolom, a zatim filtrirajte vakuumskom pumpom kako biste dobili konačni Restarutid.
Za dobivanje ciljane molekule potrebno je više reakcija organske sinteze. Osim toga, ova metoda koristi više organskih reagensa i složene radne uvjete, tako da kemijska sinteza Rotarutida u laboratoriju obično nije prikladna za proizvodnju velikih razmjera ili industrijske primjene. Za proizvodnju velikih razmjera ili industrijske primjene, metoda koja se češće koristi je priprema Rotarutida putem metoda sinteze kao što su biosinteza ili sinteza tekuće faze, koje su relativno male u laboratorijskim razmjerima, relativno jednostavne za rad i prikladne za pripremu malih količina proizvoda . Retarutid dobiven ovim metodama sličan je ili sličan po strukturi i biološkoj aktivnosti retarutidu sintetiziranom kemijskim metodama, ali ima prednosti većeg iskorištenja i lakše pripreme. Istodobno, oni također imaju bolji industrijalizacijski potencijal i šire izglede za primjenu.
Metoda 4:
Detaljni koraci za sintetiziranje retarutida korištenjem bioloških metoda u laboratoriju su sljedeći:
Priprema potrebnih gena i reagensa: nabavite plazmide koji sadrže gen Retatrutide iz biblioteke gena, transformirajte plazmide sa stanicama primateljima (kao što je Escherichia coli) i nabavite inženjerske bakterije koje sadrže gen Retatrutide.
(1) Uzgoj tehničkih bakterija: pod odgovarajućim uvjetima temperature, pH i koncentracije iona, koristite medij kulture za uzgoj tehničkih bakterija, dopuštajući im da se razmnožavaju u velikim količinama.
(2) Ekstrakcija retarutida: kultivirane inženjerske bakterije usitnjavaju se pomoću drobilice, a stanični fragmenti se odvajaju od retarutida metodama kao što su ultrafiltracija i sedimentacija kako bi se dobio sirovi proizvod.
(3) Pročišćavanje retarutida: Sirovi retarutid pročišćava se kromatografskom tehnologijom kako bi se dobio retarutid visoke čistoće.
Detekcija i identifikacija Rotarutida: Upotrijebite tekućinsku kromatografiju visoke učinkovitosti, masenu spektrometriju, nuklearnu magnetsku rezonanciju i druge tehnike za detekciju i identifikaciju strukture pročišćenog Rotarutida.
Jednadžba kemijske reakcije za biološku sintezu Retarutida u laboratoriju uglavnom uključuje kemijske reakcije tijekom procesa ekspresije gena, uključujući dva koraka: transkripciju i translaciju.
Transkripcija: otvara se dvolančana DNA, koristeći jedan lanac kao predložak za sintetiziranje lanaca RNA, što zahtijeva sudjelovanje RNA polimeraze. Jednadžba reakcije je sljedeća:
DNA dvolančana: DNApol → mRNA+DNApol
Prijevod: Ribosomi se vežu za mRNA kako bi sintetizirali peptidne lance, proces koji zahtijeva sudjelovanje aminokiselina i energije. Jednadžba reakcije je sljedeća:
Ribosom+mRNA → Peptidni lanac+GDP+Pi+H2O
Peptidni lanac+ATP → Peptidni lanac+AMP+PPi
Među njima DNApol predstavlja DNA polimerazu; MRNA predstavlja glasničku RNA; Ribosomi predstavljaju ribosome; Peptidni lanci predstavljaju polipeptidne lance; GDP predstavlja gvanozin difosfat; Pi predstavlja anorgansku fosfornu kiselinu; H2O predstavlja vodu; ATP predstavlja adenozin trifosfat; AMP predstavlja adenozin monofosfat; PPi predstavlja anorganski pirofosfat. Ove reakcije stvaraju peptidne lance potrebne za sintezu Retarutida, koji se zatim obrađuju i modificiraju u kasnijim fazama kako bi se dobio Retarutide.
Gore navedene su uobičajene metode za sintezu Rotarutida u laboratoriju, svaka s različitim prednostima, nedostacima i opsegom uporabe. Laboratorij obično koristi metode sinteze tekuće faze i sinteze čvrste faze za malu proizvodnju za istraživanje i eksperimentalnu upotrebu; Industrijska proizvodnja, s druge strane, usvaja kombinaciju biosinteze i proizvodnje tekuće/krute faze za proizvodnju velikih razmjera kako bi zadovoljila potražnju tržišta. Treba napomenuti da ove metode zahtijevaju strogu optimizaciju uvjeta i kontrolu procesa kako bi se osigurala kvaliteta i čistoća konačnog proizvoda.