Proteinaza K u prahu CAS 39450-01-6

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. jedan je od najiskusnijih proizvođača i dobavljača proteinaze k u prahu cas 39450-01-6 u Kini. Dobrodošli u veleprodajnu rasutu količinu visokokvalitetne proteinaze k u prahu cas 39450-01-6 za prodaju ovdje iz naše tvornice. Dobra usluga i razumna cijena su dostupni.

Proteinaza K u prahuje vrlo učinkovita, ne{0}}specifična serinska proteaza koja se široko koristi u molekularnoj biologiji i biokemiji, uglavnom za razgradnju proteina i uklanjanje kontaminirajućih proteina iz pripravaka nukleinske kiseline. Dobiva se iz gljivice Engyodontium album (ranije Tritirachium album) i održava svoju aktivnost u širokom rasponu temperatura (20-60 stupnjeva) i pH (4-12), čak i kada se inkubira u otopini koja sadrži SDS (0,5-1%) ili ureu (4M) pod uvjetima denaturacije.

Enzim učinkovito razgrađuje širok raspon proteina, uključujući RNazu i DNazu, cijepanjem peptidnih veza (preferirano hidrolizirajući karboksilni završetak alifatskih/aromatskih aminokiselina), te se stoga koristi za uklanjanje nukleaze u ekstrakciji DNA/RNA kako bi se osigurao integritet nukleinske kiseline. Osim toga, obično se koristi u probavi tkiva (npr. parafinski -uzorci), lizi stanica i proteomičkim studijama.

Proteinaza K u prahu obično se isporučuje u liofiliziranom obliku, koji je vrlo stabilan (-20 stupnjeva za dugotrajno skladištenje) i potrebno ga je otopiti u puferu (npr. Tris-HCl, EDTA) prije upotrebe. Njegova aktivnost ovisi o Ca²⁺, ali kelirajuća sredstva kao što je EDTA samo djelomično inhibiraju aktivnost enzima. Potrebno je izbjegavati samorazgradnju tijekom rukovanja i preporučuje se toplinska inaktivacija na 65 stupnjeva. Zbog njegove snažne sposobnosti hidrolizacije proteina, potrebna je pažljiva zaštita kako bi se izbjegao kontakt s kožom ili sluznicom.

Proteinaza k u prahu, također poznata kao Proteinaza K ili EC 3.4.21.14, serinska je proteaza izolirana i pročišćena iz Tritirachium album Limber. Od svoje prve izolacije od strane Wolfganga Ebelinga i sur. 1974., proteinaza K je naširoko korištena u biokemiji, molekularnoj biologiji, medicini i industriji zbog svoje visoke aktivnosti i široke specifičnosti supstrata.

U procesu ekstrakcije DNA i RNA, glavna funkcija proteinaze K je razgradnja proteina vezanih na nukleinske kiseline, dopuštajući DNA ili RNA da budu slobodni u otopini za naknadnu ekstrakciju i pročišćavanje. Zbog svoje stabilnosti i visoke aktivnosti u denaturirajućim sredstvima kao što su urea i SDS, proteinaza K se obično koristi za izolaciju plazmida ili genomske DNA i RNA.

proteinaza K može inhibirati aktivnost RNAse i zaštititi RNA od razgradnje.

1. Ekstrakcija DNA i RNA

 

Ekstrakcija DNK: Proteaza K može hidrolizirati histone koji se vežu na DNK, dopuštajući DNK da se odvoji u otopini. Nakon toga, nečistoće su uklonjene različitim metodama kao što je ekstrakcija fenol kloroformom, taloženje etanolom, itd., a pročišćena DNA je prikupljena.
Ekstrakcija RNA: Tijekom procesa ekstrakcije RNA, enzimi RNA obično su prisutni u okolišu, a sam sustav uzorka također može sadržavati enzime RNA, čineći RNA vrlo osjetljivom na razgradnju. Dodavanje male količine

2. Tehnologija in situ hibridizacije

 

U tehnologiji hibridizacije in situ, proteinaza K se obično koristi za prehibridizacijsku obradu za probavu proteina koji okružuju ciljnu DNA, povećava mogućnost vezanja sonde na ciljnu nukleinsku kiselinu i pojačava hibridizacijski signal. Međutim, treba napomenuti da kada je koncentracija proteinaze K previsoka, vrijeme probave predugo ili je temperatura inkubacije previsoka, to može uzrokovati oštećenje stanične strukture, što dovodi do odvajanja dijelova tkiva i nestanka staničnih jezgri, što utječe na rezultate hibridizacije. Stoga je u praktičnim primjenama potrebno strogo kontrolirati koncentraciju i vrijeme obrade proteinaze K.

3. Inaktivacija i dezinfekcija virusa

 

Proteaza K, zbog svog snažnog proteolitičkog djelovanja, može se koristiti za inaktivaciju virusa i dezinfekciju. Istraživanja su pokazala da tretiranje čiste vode i kućnih otpadnih voda određenom koncentracijom proteinaze K može učinkovito inaktivirati viruse. Proteaza K, kao dezinficijens koji inaktivira virus, može smanjiti potencijalnu štetu uzrokovanu konvencionalnim oksidativnim kemijskim dezinficijensima ljudskom tijelu, a njena proizvodnja i transport sigurni su bez nepovratnog onečišćenja okoliša.

4. Western blotting i pulsna elektroforeza

 

Proteaza K također se široko koristi u pripremi kromosomske DNA za pulsnu elektroforezu, Western blotting i druge pokuse. U Western blot eksperimentima, proteinaza K se može koristiti za uklanjanje ne-specifičnih proteina iz uzorka, poboljšavajući specifičnost i osjetljivost blota. U eksperimentima pulsne elektroforeze, proteinaza K može razgraditi proteinske nečistoće u uzorcima DNK i poboljšati učinkovitost elektroforeze.

5. Detekcija i identifikacija proteina

 

Proteinaza k u prahutakođer se može koristiti za detekciju i identifikaciju određenih proteina. Na primjer, u proučavanju transmisivne spongiformne encefalopatije (TSE), proteinaza K se može koristiti za probavu proteina u uzorcima moždanog tkiva i za identifikaciju prisutnosti prionskih proteina otkrivanjem otpornosti patogenih priona na proteinazu K. Osim toga, proteinaza K se također može koristiti za pokuse kao što je određivanje lokalizacije enzima na staničnoj membrani i uklanjanje kationskih proteina vezanih na endotoksine (kao što je lizozim i ribonukleaza A).

1. Medicinsko polje

 

Klinička uporaba: Proteaza K ima određenu medicinsku vrijednost u medicini. Na primjer, liječenje probavnih smetnji sa želučanom proteazom, liječenje bronhitisa sa kiselom proteazom, liječenje vaskulitisa sa elastazom, itd. Osim toga, tripsin, kimotripsin, itd. također se često koriste za pročišćavanje kirurških gnojnih rana i liječenje pleuralnih seroznih priraslica.
Otkrivanje i dijagnoza virusa: Proteaza K također ima potencijalne primjene u otkrivanju i dijagnozi virusa. Probavljanjem proteina u uzorku virusa i izlaganjem nukleinske kiseline virusa, pruža pogodnost za naknadno testiranje nukleinske kiseline.

2. Industrijski sektor

 

Kožna industrija: Proteaza K se koristi u kožnoj industriji za uklanjanje dlaka i tretman za omekšavanje, što može uštedjeti vrijeme i poboljšati higijenske uvjete rada.
Tekstilna industrija: Proteaza K se može koristiti u tekstilnoj industriji kao što je degumiranje svile.
Prehrambena industrija: Proteaza K se može koristiti u prehrambenoj industriji za omekšavanje mesa, bistrenje alkohola itd.
Deterdžent: deterdžent za pranje rublja s dodatkom enzima novi je proizvod u deterdžentima. Deterdžent za pranje rublja koji sadrži alkalnu proteazu može ukloniti mrlje od krvi i proteinsku prljavštinu s odjeće. No, kada ga koristite, pazite da ne dodirnete kožu kako ne biste oštetili protein na površini kože i izazvali alergijske reakcije poput osipa i ekcema.

Strukturne karakteristike

 

Molekularna težina proteinaze K je približno 28900 daltona (28,9 kDa), a postoje i literaturni izvještaji o 29,3 kDa. Njegov aminokiselinski slijed i -trodimenzionalna prostorna struktura vrlo su slični subtilizinu iz obitelji serin proteaza, ali postoje i neke jedinstvene značajke.

Struktura disulfidne veze: Molekule proteaze K sadrže disulfidne veze, koje povećavaju njihovu stabilnost i omogućuju im održavanje aktivnosti u širokom pH rasponu i uvjetima visoke temperature.
Mjesta vezivanja Ca²⁺:Proteinaza k u prahusadrži dva Ca²⁺ vezna mjesta, koja su, iako daleko od aktivnog centra, ključna za održavanje katalitičke aktivnosti enzima. Uklanjanje Ca²⁺ uzrokovat će gubitak oko 80% aktivnosti proteaze K, a ponovno uvođenje Ca²⁺ može samo djelomično vratiti njezinu aktivnost.
Katalitička trijada: Proteaza K ima katalitičku trijadu Asp-His69-Ser224, koja je ključna struktura za njezinu hidrolitičku aktivnost.

Mehanizam djelovanja

 

Proteaza K može preferirano hidrolizirati esterske i peptidne veze uz C-kraj hidrofobnih aminokiselina, aminokiselina koje sadrže sumpor-i aromatskih aminokiselina, hidrolizirajući proteine ​​u kratke peptide. Njegov mehanizam djelovanja uglavnom uključuje sljedeće korake:

Vezanje enzimskog supstrata: Nakon što se proteaza K pomiješa sa supstratom, supstrat se veže na aktivno mjesto enzima, tvoreći kompleks enzimskog supstrata.
Katalitička reakcija: pod djelovanjem aktivnog mjesta, peptidna veza supstrata se hidrolizira u produkt odvojen od enzima.
Snažan učinak razgradnje proteaze K čini je ključnim reagensom u raznim biokemijskim reakcijama, posebice u procesima ekstrakcije DNA i RNA. Proteaza K može učinkovito razgraditi proteine ​​vezane na nukleinske kiseline, otpustiti nukleinske kiseline i inhibirati aktivnost nukleaza, smanjujući razgradnju nukleinskih kiselina tijekom ekstrakcije.

Proteinaza k u prahu, kao vrlo aktivna i supstratno specifična serin proteaza, ima širok raspon primjena u biokemiji, molekularnoj biologiji, medicini i industriji. Može razgraditi proteine ​​koji se vežu na nukleinske kiseline i otpuštaju nukleinske kiseline; Povećati mogućnost da se sonde vežu na ciljne nukleinske kiseline u tehnologiji in situ hibridizacije; Koristi se za inaktivaciju virusa i dezinfekciju; Ukloniti nečistoće proteina u eksperimentima Western blot i pulsne elektroforeze; Ima ljekovitu vrijednost u području medicine; Koristi se u industrijskim područjima kao što su prerada kože, tekstilna industrija, prehrambena industrija i proizvodnja deterdženata. Međutim, kada koristite proteinazu K, potrebno je obratiti pozornost na njezin način skladištenja i uvjete uporabe kako bi se osigurala njezina stabilnost i aktivnost.

Proteinaza K je serinska proteaza širokog-spektra koja se široko koristi u molekularnoj biologiji, biokemiji i medicinskim istraživanjima zbog svojih jedinstvenih enzimskih svojstava i stabilnosti. Kao smrznut-osušeni prašak, proteinaza K u prahu igra ključnu ulogu u eksperimentima kao što su ekstrakcija nukleinske kiseline, probava proteina i homogenizacija tkiva. Međutim, uporaba bilo kojeg biološkog reagensa dolazi s potencijalnim rizicima, a njegove štetne reakcije mogu uključivati ​​zdravlje operatera i sigurnost eksperimentalnog okruženja.

Popularni tagovi: proteinaza k u prahu cas 39450-01-6, dobavljači, proizvođači, tvornica, veleprodaja, kupovina, cijena, rasuto, na prodaju