Liraglutide prašak CAS 204656-20-2

Prah liraglutida, Molekularna formula C172H265N43O51, CAS 204656-20-2, molekularna masa 1209.40. To je umjetno sintetizirani acilirani humani glukagon poput peptida-1 (GLP-1) analognog s preko 97% sličnosti sekvence u usporedbi s prirodnim GLP-1. Može se otopiti u vodi, etanolu i propilen glikolu. 34. položaj lizina prirodne molekule GLP-1 zamijenjen je argininom, koji ne samo da čuva i produžava vrijeme vezanja između acilacijskih proizvoda i proteina, već i značajno prevladava nedostatak lakog razgradnje GLP. U normalnim uvjetima skladištenja pokazuje dobru stabilnost, a njegova vodena otopina može održavati fizičku i kemijsku stabilnost najmanje 2 godine.

Genetska toksičnost: Rezultati Ames testa zaPrah liraglutida, test kromosomske aberacije za limfocite periferne krvi i test štakora Mikronukleus, svi su bili negativni.

Reproduktivna toksičnost:

1. Mužjaci štakora supkutano su ubrizgani s 0,1, 0,25 i 1,0 mg/kg/d liraglutida 4 tjedna prije parenja i tijekom parenja. U dozi od 1,0 mg/kg/d, plodnost muških životinja nije izravno utjecala. Prema proračunima AUC u plazmi, sistemska izloženost nastala ovom dozom bila je otprilike 11 puta veća od izloženosti čovjeku pri maksimalnoj preporučenoj dozi ljudske doze (MRHD). Subkutana injekcija od 1,0 mg/kg u ženke štakora rezultirala je povećanom ranom embrionalnom smrću, vidljivim debljanjem i smanjenim unosom hrane.

2. Od 2 tjedna prije parenja do 17. dana trudnoće kod ženskih štakora, davani su potkožni injekcija od 0,1, 0,25 i 1,0 mg/kg/d liraglutida. Prema proračunima AUC u plazmi, sistemska izloženost generirana ove tri doze bila je približno 0,8, 3 i 11 puta veća od izloženosti ljudskoj izloženosti prema MRHD -u. U grupi doze od 1 mg/kg/d došlo je do neznatnog povećanja broja ranih embrionalnih smrti. U svim dozama, uočene su nepravilnosti fetusa, bubrežne i vaskularne varijacije, nepravilna okolinja lubanje i cjelovito stanje prekomjerne okoliča. Pri dozi od 1,0 mg/kg/d uočene su pjegave jetre i lagano uvijanje rebra. Učestalost fetalnih malformacija koje prelaze isto razdoblje, a povijesna kontrola je: orofaringealne malformacije i/ili stenoza na otvaranju grla u dozi od 01 mg/kg/d, te pupčane nedostatke u dozama od 0,1 i 0,25 mg/kg/d.

6. do 18. dana trudnoće, zečevi su supkutano ubrizgani liraglutidom u koncentracijama od 0,01, 0,025 i 0,05 mg/kg/d. Prema proračunima AUC u plazmi, sistemska izloženost trudničkih zečeva bila je niža od one kod ljudi tijekom MRHD -a. U svim dozama, težina fetusa smanjila se, a ukupna učestalost teških nepravilnosti fetusa povećala se na način ovisan o dozi. U dozama od 0,01 mg/kg/d (bubrega, kosti ramena i slezine), veće od ili jednake 0,01 mg/kg/d (oči i prednjeg dijela), 0,025 mg/kg/d (mozak, rep i kralježnici, velike krvne žile i kbilci, krug), veće od ili jednakih od 0,0mg), 0,05 mg/kg/d (parietalna kost i velike krvne žile), učestalost malformacija premašila je onu suvremene i povijesne kontrole. Nepravilna okomifikacija i/ili skeletne nepravilnosti nalaze se u lubanji i ovratniku, kralježnici i rebrima, sternumu, zdjelici, kokcisu te kostima ramena i slezina; Vidljiva je i lagana varijacija skeleta ovisna o dozi. Visceralne abnormalnosti nalaze se u krvnim žilama, plućima, jetri i jednjaku. Sve skupine liječenja pokazale su dvostruke režnjeve ili bifurkacije žučnog mjehura, ali u kontrolnoj skupini nije primijećena slična situacija.

4. Tijekom razdoblja od 6. dana trudnoće do odvikavanja ili prestanka dojenja 24. dana, ženke štakora supkutano su ubrizgane s 0,1, 0,25 i 1,0 mg/kg/d liraglutida. Prema proračunima AUC u plazmi, sistemska izloženost bila je otprilike 0,8, 3 i 11 puta veća od izloženosti čovjeku tijekom MRHD -a. Period isporuke većine životinja u skupini za liječenje malo je odgođen. Prosječna težina novorođenčadi u skupini za liječenje bila je niža od one u kontrolnoj skupini. Ženke štakora u grupi doze od 1,0 mg/kg/d pokazale su gubitak krvi i uzbuđenje tijekom porođaja. Prosječna tjelesna težina štakora potomstva F2 u skupini za liječenje od rođenja do 14. dana nakon rođenja bila je niža od one u kontrolnoj skupini, ali razlike između skupina nisu dostigle statističku značajnost.

Prah liraglutidaje umjetno sintetizirani acilirani ljudski glukagon poput peptida-1 (GLP-1) analognog s preko 97% sličnosti u odnosu na prirodni GLP-1. Molekularna struktura liraglutida uključuje sljedeće glavne karakteristike: 34. položaj lizina prirodne molekule GLP-1 zamijenjen je argininom, koji ne samo da očuva i produžava vrijeme vezanja između produkata acilacije i proteina, već i značajno prevladava nedostatak GLP-ove lagane degradacije; Dodatni bočni lanac masnih kiselina dodan je 26. lizinu, što pomaže produžiti poluživot proizvoda acilacije in vivo. Ove jedinstvene molekularne promjene učinile su delilaglutid pokazuju izvanredne učinke u kliničkom liječenju, posebno kod dijabetesa i gubitka težine.

Kemijske metode za sintetiziranje liraglutida uglavnom uključuju sljedeće korake:

1. Sinteza fragmenta

Prvo, podijelite cijeli liraglutid na nekoliko segmenata, koji se općenito može podijeliti u pet segmenata: 1. do 4. aminokiseline, 5. do 10. aminokiseline, 11. do 16. aminokiseline, 17. do 24. aminokiseline i 25. do 31. aminokiseline. Svaki se fragment sintetizira odvojeno, što može smanjiti poteškoće i troškove sinteze peptida i poboljšati učinkovitost sinteze.

Za sintezu svakog fragmenta općenito se koriste sintezu čvrste faze ili metode sinteze tekuće faze. Metoda sinteze u čvrstoj fazi uključuje povezivanje karboksilnih skupina aminokiselina na smolu, a zatim sekvencijalno dodavanje aminokiselina u smolu u nizu i na kraju odsjeći peptide iz smole. Metoda sinteze u tekućoj fazi uključuje otapanje svih aminokiselina u organskom otapalu, a zatim ih kondenzira u nizu kako bi se stvorio fragmenti peptida.

2. Reakcija spajanja

Izvršite reakciju spajanja na 5 fragmenata peptida sintetiziranih u koraku 1 kako bi tvorio kompletan liraglutid. Reakcija spajanja može se provesti pomoću kemijskih ili bioloških sredstava za spajanje, a specifična metoda može se odabrati u skladu s stvarnim potrebama.

U reakciji spajanja potrebno je povezati amino skupinu svakog fragmenta s karboksilnom skupinom sljedećeg fragmenta. Da bi se to postiglo, obično je potrebno koristiti sredstva za kondenzaciju poput DIC -a ili BOP -a. Ovi agensi za kondenzaciju mogu promicati reakciju između amino i karboksilnih skupina, formirajući peptidne veze. U reakciji spajanja pažnja treba obratiti i na kontrolu reakcijskih uvjeta, poput temperature, pH vrijednosti i vremena reakcije, kako bi se osigurao gladak napredak reakcije.

3. Pročišćavanje i identifikacija

Sintetizirani liraglutid treba pročistiti i identificirati kako bi se osigurala čistoća i kvaliteta proizvoda. Pročišćavanje se obično provodi pomoću metoda kao što su tekuća kromatografija visokih performansi (HPLC) ili elektroforeza, nakon čega slijedi identifikacija korištenjem masene spektrometrije, nuklearne magnetske rezonancije i drugih metoda. Kroz ta sredstva može se osigurati da su molekularna masa i slijed sintetiziranog proizvoda u skladu s očekivanjima, a nema nečistoća ili ostataka nusproizvoda.

4. Ostale izmjene

Uz gore navedene korake, ponekad su potrebne i druge modifikacije, poput dodavanja ili uklanjanja zaštitnih skupina. Ovi su koraci također bitni jer mogu zaštititi aktivne skupine peptida od uništenja ili se pojavljuju sporedne reakcije, poboljšavajući kvalitetu i prinos sintetiziranogPrah liraglutida.

Navedeno su glavne kemijske metode za sintetiziranje liraglutida, ali naravno, neke detalje i tehnike trebaju se primijetiti u praktičnoj operaciji. Na primjer, odabir odgovarajućeg sustava otapala, kontrola temperature i pH i korištenje odgovarajućih katalizatora može utjecati na učinkovitost sinteze i kvalitetu proizvoda. Stoga se u praktičnom radu treba izvršiti prilagodbe i optimizacije u skladu s određenim okolnostima.

Liraglutid (dugotrajni agonist receptora GLP-1) igra značajnu ulogu u liječenju dijabetesa. Da bi se osigurala njegova kontroliranost kvalitete, potrebno je uspostaviti znanstvene i rigorozne analitičke metode i provoditi sustavnu validaciju kako bi se osigurala pouzdanost ovih metoda. Sljedeća analiza provodi se iz tri aspekta: stavke validacije, metode validacije i ključne kontrolne točke.

Predmeti za provjeru jezgre i tehnički zahtjevi

Specifičnost

Cilj: Dokazati da metoda može razlikovati liraglutid od nečistoća, proizvoda degradacije i ekscipienata.

Strategija provedbe:

Kromatografija: Koristite HPLC-UV ili UPLC-MS. Kroz testove prisilne razgradnje (kao što su visoka temperatura, izloženost svjetlosti, hidroliza kiseline-baza) stvaraju proizvode razgradnje i provjerite stupanj razdvajanja glavnog vrha i vrha nečistoće (veći od ili jednak 1,5). Na primjer, u proučavanju modela APOE-/- miša, nakon oksidiranja liraglutida, proizvode razgradnje (poput adukata mravlje kiseline) trebaju se potvrditi kromatografskom analizom kako bi se osigurao učinak razdvajanja produkata razgradnje s glavnog vrha.

Spektroskopija: Upotrijebite PDA detektor za usporedbu UV spektra glavnog vrha i nečistoća i potvrđuju čistoću vrhova.

Prazna kontrola: Provjerite odsutnost lažnih pozitivnih signala pomoću uzoraka bez liraglutida (poput otopina ekscipienta).

 

Točnost

Cilj: Da bi se osiguralo da su izmjereni rezultati blizu prave vrijednosti, a stopa oporavka se kontrolira unutar 98% - 102%.

Strategija provedbe:

Standardni test oporavka: dodajte poznatu količinu referentne tvari u uzorak s poznatim sadržajem liraglutida i izmjerite stopu oporavka. Na primjer, u analizi formulacije dodajte 0,5 mg/ml, 1,0 mg/ml i 1,5 mg/ml liraglutida u praznu otopinu ekscipienta, svaku koncentraciju ponovite 3 puta i izračunajte prosječnu brzinu oporavka.

Metoda usporedbe: Usporedite s klasičnim metodama (poput titracije) ili provjerenim metodama (poput metoda farmakopeje), a odstupanje rezultata treba biti manje od ili jednako 2%.

 

Preciznost

Cilj: Procijeniti stupanj bliskosti rezultata ponovljenih mjerenja, s RSD manjim ili jednakim 2%.

Strategija provedbe:

Ponovljivost: Provedite 6 uzastopnih mjerenja istog uzorka od istog analitičara, isti instrument i istu seriju uzoraka i izračunajte RSD.

Srednja preciznost: Izračunajte RSD određivanjem iste serije uzoraka od strane različitih analitičara, različitih instrumenata i različitih datuma. Na primjer, u određivanju sadržaja liraglutida, RSD ponovljivost treba biti manji ili jednak 1,5%, a intermedijarna preciznost RSD treba biti manja ili jednaka 2,0%.

Ponovljivost: kolaborativna provjera više laboratorija (kao što su standardne metode farmakopeje), RSD bi trebao biti u skladu s principima smjernica.

 

Ograničenje otkrivanja i ograničenje kvantifikacije

Cilj: odrediti minimalnu koncentraciju koju metoda može otkriti i kvantificirati liraglutid.

Strategija provedbe:

Metoda omjera signal-šum: Odredite LOD s omjerom signal-šum od 3: 1 i odredite LOQ s omjerom signal-šum od 10: 1. Na primjer, u HPLC-UV metodi, LOD liraglutida može biti čak 0,01 ug/ml, a LOQ 0,05 ug/ml.

Standardna metoda krivulje: Izračunajte LOD i LOQ pomoću signala odgovora standardnih tvari s niskom koncentracijom (poput 0,1 ug/ml - 1 Ug/ml).

 

Linearnost

Cilj: Dokazati da je signal odgovora proporcionalan koncentraciji, s r² većim ili jednakim 0,999.

Strategija provedbe:

Test koncentracije gradijenta: Pripremite 5-7 gradijenta koncentracije (poput 0,1 mg/ml - 2.0 mg/ml) standardnih otopina, izmjerite vršnu površinu ili vrijednost odziva i nacrtajte standardnu ​​krivulju.

Preostala analiza: Provjerite jesu li ostaci nasumično raspoređeni i nema sustavnog odstupanja.

 

Raspon

Cilj: Da bi se utvrdio primjenjivi raspon koncentracije metode, obično 120% LOQ do gornje granice linearnosti.

Strategija provedbe:

Određivanje sadržaja: Raspon je postavljen na 80% - 120% označenog iznosa. Na primjer, raspon određivanja sadržaja formulacije liraglutida trebao bi biti 0,4 mg/ml - 1.2 mg/ml. Kontrola nečistoće: Prema ICH Q3D smjernici, postavite granični raspon nečistoća (npr. Jednostruka nečistoća manja od ili jednaka 0,5%, ukupna nečistoća manja od ili jednaka 2,0%).

Dokumenti za provjeru i upravljanje podacima

01

Plan provjere i izvještaj

Jasno definirajte stavke valjanosti, metode, standarde prihvaćanja i abnormalne postupke rukovanja. Na primjer, ako precizni RSD premašuje granicu, potrebno je istražiti greške instrumenata ili operativne pogreške.

Zabilježite originalne podatke (poput kromatograma, standardnih krivulja, tablice izračuna brzine oporavka) kako biste osigurali sljedivost.

02

Razvoj metode indikacije stabilnosti

Za obavezne testove razgradnje, on bi trebao pokriti oksidaciju, izlaganje svjetlosti, hidrolizu itd. Za simulaciju stvarnih uvjeta skladištenja. Na primjer, liraglutid je stavljen na 60 stupnjeva 48 sati, stopa razgradnje trebala bi biti veća od ili jednaka 10% kako bi se provjerila sposobnost metode za otkrivanje proizvoda razgradnje.

03

Regulatorna usklađenost

Slijedite ICH Q2 (R2), USP<1225>, i kineske GMP smjernice kako bi se osiguralo da stavke validacije pokrivaju temeljne pokazatelje kao što su specifičnost i točnost.

Za analizu elementarne nečistoće trebala bi biti u skladu s ICH Q3D i USP<233>Zahtjevi, kontrolirajući granice elemenata 1 klase kao što su AS, CD i PB.

Popularni tagovi: Liraglutide prah CAS 204656-20-2, dobavljači, proizvođači, tvornica, veleprodaja, kupovina, cijena, skupno, na prodaju