Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. jedan je od najiskusnijih proizvođača i dobavljača 3xflag peptida cas 402750-12-3 u Kini. Dobrodošli u veleprodaju visokokvalitetnog 3xflag peptida cas 402750-12-3 za prodaju ovdje iz naše tvornice. Dobra usluga i razumna cijena su dostupni.
3XFLAG peptidje važan slijed peptidnog markera koji se široko koristi u ekspresiji proteina i procesima pročišćavanja u biomedicinskim istraživanjima. Molekulska formula C120H169N31O49S, CAS 402750-12-3. Sastavljen od 23 aminokiseline, njegov slijed sadrži tri ponovljena Asp Tyr Lys Xaa Xaa Asp motiva, koji mu daju specifične strukturne značajke.
Ima dobru topljivost u specifičnim otapalima. Na primjer, u DMSO-u, njegova topljivost je visoka, što ga čini pogodnim za operacije i pokuse u otopini. Osim toga, također može postići dobar učinak otapanja u vodi blagim zagrijavanjem. Također ima neka posebna svojstva. Na primjer, ima dobru antigenost i reaktivnost i može se vezati na specifična anti FLAG antitijela. Ova sposobnost vezanja čini ga široko primjenjivim u eksperimentima kao što je imunoprecipitacija. Kompetitivnim vezanjem na anti-FLAG antitijela, FLAG fuzijski eksprimirani protein koji se veže na anti-FLAG antitijela može se eluirati tijekom imunoprecipitacije, čime se postiže lokalizacija, detekcija i pročišćavanje ciljnog proteina.
|
Prilagođeni čepovi i čepovi za boce:
|
|
|
Kemijska formula |
C120H169N31O49S |
|
Točna misa |
2860 |
|
Molekularna težina |
2862 |
|
m/z |
2861 (100.0%), 2860 (77.0%), 2862 (32.9%), 2862 (31.4%), 2863 (22.1%), 2862 (11.5%), 2863 (10.1%), 2861 (8.8%), 2864 (8.1%), 2862 (7.8%), 2863 (7.4%), 2863 (5.3%), 2863 (4.5%), 2862 (3.5%), 2864 (3.3%), 2864 (3.2%), 2865 (2.2%), 2865 (2.1%), 2864 (2.1%), 2862 (1.9%), 2862 (1.9%), 2861 (1.5%), 2864 (1.5%), 2861 (1.4%), 2864 (1.4%), 2863 (1.2%), 2864 (1.2%) |
|
Elementarna analiza |
C, 50.36; H, 5.95; N, 15.17; O, 27.39; S, 1.12 |
3XFLAG peptidje oznaka koja se koristi u istraživanju proteina, a sastoji se od 8 aminokiselina sa sekvencom DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Njegova glavna funkcija je služiti kao marker za ekspresiju i pročišćavanje proteina, pružajući prikladno i učinkovito sredstvo u istraživanju.
1. Pročišćavanje afiniteta:
Može se koristiti kao oznaka za pročišćavanje proteina, a zahvaljujući svom visokom afinitetu s anti FLAG protutijelima, ciljani protein može se lako pročistiti. Obično se ciljni protein kotransfecira u stanice ekspresijskim vektorom koji sadrži 3X FLAG PEPTID, a zatim se pročišćava afinitetom upotrebom anti-FLAG antitijela za brzo i učinkovito dobivanje ciljnog proteina visoke čistoće.
2. Imunološko ispitivanje:
Zbog svoje visoke imunogenosti, može se koristiti za otkrivanje ekspresije i lokalizacije proteina. Upotrebom specifičnih anti-FLAG protutijela mogu se izvesti eksperimentalne tehnike poput imunoblotinga i imunofluorescentnog bojenja za brzo i točno otkrivanje razine ekspresije i distribucije ciljanih proteina.
3. Filtriranje klonova:
Također se može koristiti za praktičnost skrininga proteinskih klonova. U procesu konstrukcije vektora ekspresije proteina, povezivanje genske sekvence ciljnog proteina sa sekvencom 3XFLAG može olakšati probir pozitivnih klonova s ciljnim proteinom kroz imunološku detekciju i druge metode, čime se ubrzava proces istraživanja funkcije proteina.
4. Imunoprecipitacija:
Također se može koristiti za pokuse imunoprecipitacije proteina. Vezivanjem proteina koji sadrže 3X FLAG PEPTIDE oznake na anti-FLAG antitijela, a zatim korištenjem adsorpcijskih materijala kao što su protein A/G agaroza ili magnetske kuglice, ciljni protein i njegovi partneri u interakciji mogu se selektivno istaložiti iz staničnih ekstrakata kako bi se proučila mreža interakcije proteina.
5. Pregled droga:
Također se može koristiti u istraživanju lijekova. Kombiniranjem oznake 3X FLAG PEPTIDE s proteinom od interesa, može se postići visoko-probir proteina. Ova metoda probira može se koristiti za otkrivanje novih ciljeva lijekova, procjenu interakcija proteina lijekova i tako dalje.
6. Istraživanje funkcije proteina:
Uvođenje oznaka ne utječe značajno na prirodnu strukturu i funkciju proteina, te se stoga može koristiti za proučavanje bioloških funkcija, subcelularne lokalizacije, interakcija i prijenosa signala proteina. Uvođenjem oznake 3X FLAG PEPTIDE, mogu se-provesti dubinska istraživanja bioloških karakteristika proteina, što pomaže u otkrivanju njihovih mehanizama djelovanja u staničnoj biologiji i fiziologiji.
3XFLAG peptidje peptid koji sadrži 8 aminokiselina, sa sekvencom DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Obično se koristi kao oznaka proteina za praktično pročišćavanje, detekciju i istraživanje ciljanih proteina. U procesu biosinteze može se dobiti kemijskom sintezom ili metodama genetskog inženjeringa. Slijede detaljni koraci metoda genetskog inženjeringa:
1. Dizajnirajte i sintetizirajte gene:
Prvo, potrebno je dizajnirati umjetni gen koji sadrži 3X FLAG PEPTIDE sekvencu. Ovaj bi gen trebao sadržavati 3X FLAG PEPTIDE sekvencu, kao i odgovarajuće promotore, terminatore i selekcijske markere (kao što su geni za toleranciju na antibiotike). Dizajn gena treba uzeti u obzir karakteristike i potrebe ekspresije ciljnog domaćina.
2. Kloniranje gena:
Zatim će se dizajnirani umjetni geni klonirati u odgovarajuće ekspresijske vektore. Uobičajeno korišteni vektori uključuju plazmide, virusne vektore itd. Proces kloniranja obično uključuje sljedeće korake:
-PCR amplifikacija: Upotreba lančane reakcije polimerazom (PCR) za umnožavanje sekvence ciljnog gena iz predloška DNK.
-Probava i povezivanje: PCR proizvodi se probavljaju s ekspresijskim vektorima pomoću restrikcijskih endonukleaza, a zatim se povezuju pomoću DNA ligaza.
-Transformacija: Transformacija povezanog ekspresijskog vektora u bakterijske domaćine kao što je Escherichia coli kako bi se formirao rekombinantni plazmid.
-Identifikacija: rekombinantni plazmidi identificirani su putem PCR-a, probave enzima, sekvenciranja DNK i drugih metoda za potvrdu da je ciljni gen uspješno kloniran u vektor.
3. Ciljni protein ekspresije:
Transfektirajte konstruirani ekspresijski vektor u ciljne stanice domaćina, kao što su stanice sisavaca, stanice kvasca, stanice insekata, itd. Unutar stanica, ekspresijski vektor se transkribira u mRNA, a zatim prevodi u proteine. 3X FLAG PEPTID će se eksprimirati zajedno s ciljnim proteinom kao proteinska oznaka.
4. Ekstrakcija proteina:
Prikupite transficirane stanice i izvedite fragmentaciju stanica, centrifugiranje i druge tretmane kako biste dobili ukupni proteinski ekstrakt.
5. Pročišćeni protein:
Korištenjem tehnika afinitetnog pročišćavanja kao što su imunoprecipitacija i afinitetna kromatografija, ciljni proteini koji sadrže 3X FLAG PEPTIDE oznake pročišćeni su iz ukupnog ekstrakta. To obično uključuje vezanje anti-FLAG antitijela na proteine koji sadrže 3X FLAG PEPTID, a zatim njihovo odvajanje pomoću kolona afinitetne kromatografije ili magnetskih kuglica.
6. Identificirajte proteine:
Pročišćeni protein identificiran je i kvantificiran SDS-PAGE gel elektroforezom, imunoblotingom, spektrometrijom mase i drugim tehnologijama kako bi se osigurala njegova čistoća i integritet.
Nuspojave
U biomedicinskim istraživanjima i eksperimentima povezanim s proteinima, tag peptidi igraju ključnu ulogu. Oni mogu pomoći istraživačima u pročišćavanju, otkrivanju i lociranju ciljnih proteina, uvelike promičući razvoj znanosti o proteinima.3XFLAG peptidje uobičajeni i široko korišteni tag peptid sastavljen od tri ponovljene FLAG tag sekvence. Oznaku FLAG izvorno su dizajnirali Hopp et al. 1988., a kasnije se razvio u varijante kao što je 3XFLAG, koji imaju visok afinitet i specifičnost i mogu se vezati na specifična antitijela, olakšavajući kasniju izolaciju i identifikaciju. Iako je 3XFLAG donio mnoge pogodnosti u eksperimentima, kao i drugi biološki agensi, također može uzrokovati neke nuspojave.
Nuspojave povezane s imunološkim sustavom
Imunogenost
Imunogenost se odnosi na sposobnost tvari da stimulira tjelesni imunološki sustav da proizvede imunološki odgovor. 3XFLAG, kao egzogeni peptidni segment, imunološki sustav tijela može prepoznati kao "neosobnu" komponentu, čime se pokreće imunološki odgovor. Iako je sekvenca 3XFLAG relativno kratka, u nekim slučajevima ipak može aktivirati B stanice i T stanice, što dovodi do proizvodnje protutijela. Ta se protutijela ne vežu samo za slobodni 3XFLAG, već također mogu prepoznati i vezati se na fuzijske proteine koji izražavaju oznaku 3XFLAG, utječući na normalnu funkciju i distribuciju fuzijskog proteina.
Alergijske reakcije
Alergijska reakcija je abnormalni imunološki odgovor uzrokovan pretjeranom osjetljivošću imunološkog sustava na određene alergene. Pojedinačni pojedinci mogu doživjeti alergijske reakcije kada koriste 3XFLAG za eksperimentiranje ili liječenje. Ozbiljnost simptoma alergijskih reakcija varira. Blagi slučajevi mogu se manifestirati lokalnim simptomima kao što su svrbež, osip i eritem, dok teški slučajevi mogu izazvati sistemske alergijske reakcije kao što je anafilaktički šok, karakteriziran naglim padom krvnog tlaka, otežanim disanjem i gubitkom svijesti, što predstavlja ozbiljnu prijetnju sigurnosti života.
Alergijske reakcije
Mehanizam alergijskih reakcija uglavnom je povezan s IgE protutijelima u imunološkom sustavu. Kada tijelo prvi put dođe u kontakt s 3XFLAG-om, imunološki sustav ga prepoznaje kao alergen i stimulira B stanice na proizvodnju specifičnih IgE antitijela. Ova se IgE antitijela vežu za površinu mastocita i eozinofila. Kada tijelo ponovno dođe u kontakt s 3XFLAG-om, on se veže za IgE protutijela na površini stanice, potičući mastocite i eozinofile da otpuštaju bioaktivne posrednike kao što su histamin i leukotrieni, što dovodi do pojave simptoma alergije.
Rizik od autoimunih bolesti
Dugotrajna ili ponavljana izloženost 3XFLAG-u može povećati rizik od razvoja autoimunih bolesti. Autoimune bolesti odnose se na vrstu bolesti u kojoj tjelesni imunološki sustav greškom napada vlastita tkiva i organe, što rezultira oštećenjem tkiva i funkcionalnim oštećenjem. 3XFLAG može potaknuti imunološki sustav da proizvodi unakrsno reaktivna protutijela i T stanice putem mehanizma molekularne simulacije, gdje je njegov slijed aminokiselina sličan slijedu određenih proteina u samom tijelu.
Ove imunološke stanice i antitijela ne samo da napadaju strani 3XFLAG, već i nenamjerno oštećuju normalna tkiva tijela, što dovodi do autoimunih bolesti. Na primjer, određene autoimune bolesti kao što su sistemski eritematozni lupus i reumatoidni artritis mogu biti povezane s autoimunim reakcijama izazvanim egzogenim tvarima. Iako trenutačno nema jasnih dokaza koji upućuju na to da 3XFLAG izravno uzrokuje autoimune bolesti, ovaj se potencijalni rizik ne može zanemariti.
Utjecaj na staničnu funkciju
U nekim eksperimentalnim studijama utvrđeno je da visoke koncentracije 3XFLAG-a mogu imati toksične učinke na stanice. Manifestacije citotoksičnosti uključuju promjene u staničnoj morfologiji, poremećaj integriteta stanične membrane, promjene unutarstanične aktivnosti enzima i inhibiciju stanične proliferacije. Njegov mehanizam djelovanja mogao bi biti povezan s interakcijom između 3XFLAG-a i stanične membrane. Zbog jakog negativnog naboja 3XFLAG-a,
može se vezati za pozitivno nabijene komponente na staničnoj membrani putem elektrostatskih interakcija, mijenjajući propusnost i fluidnost stanične membrane, što dovodi do istjecanja unutarstaničnih tvari ili ulaska štetnih tvari izvana, čime utječe na normalne fiziološke funkcije stanice. Osim toga, 3XFLAG također može ući u unutrašnjost stanica, ometati signalne putove, sintezu proteina i druge procese, dodatno pogoršavajući oštećenje stanica.
Učinci na stanične signalne putove
3XFLAG može ometati unutarstanične signalne putove i utjecati na normalne fiziološke aktivnosti stanica. Stanični signalni put zajednički je pojam za niz molekularnih događaja u kojima stanice reagiraju na vanjske podražaje, regulirajući važne procese kao što su stanični rast, diferencijacija i apoptoza. 3XFLAG može ometati normalan prijenos signalnih putova interakcijom s ključnim molekulama u signalnom putu, mijenjajući aktivnost ili razine ekspresije signalnih molekula.
Na primjer, može se vezati za receptore na površini stanice, kompetitivno inhibirajući vezanje prirodnih liganada za receptore i blokirajući prijenos signala; Alternativno, može ući u stanicu i vezati se za proteine prijenosa signala, utječući na fosforilaciju, defosforilaciju i druge procese modifikacije, ometajući prijenos i pojačanje signala. Ova interferencija sa staničnim signalnim putovima može dovesti do stanične disfunkcije, utječući na procese kao što su stanična proliferacija, diferencijacija i apoptoza, što zauzvrat može imati negativne učinke na normalan razvoj i funkciju tkiva i organa.
Učinci na stanični metabolizam
Stanični metabolizam opći je izraz za niz kemijskih reakcija koje se odvijaju unutar stanica, osiguravajući energiju i materijalnu osnovu za stanične životne aktivnosti. 3XFLAG može utjecati na stanične metaboličke procese, ometati staničnu proizvodnju energije i sintezu tvari. Na primjer, može utjecati na funkciju mitohondrija, koji su glavna mjesta za aerobno disanje i proizvodnju energije u stanicama. 3XFLAG može promijeniti propusnost i potencijal mitohondrijske membrane interakcijom s proteinima ili lipidima na membrani, utječući na funkciju dišnog lanca mitohondrija i sintezu ATP-a,
što dovodi do nedovoljne opskrbe staničnom energijom. Osim toga,3XFLAG peptidtakođer može ometati unutarstanične procese kao što su metabolizam glukoze i metabolizam lipida, utječući na ravnotežu sinteze i razgradnje tvari u stanicama i negativno utječući na normalne fiziološke funkcije stanica
Često postavljana pitanja
Što je 3X ZASTAVA?
+
-
3X FLAG peptid je sintetski peptid od 23 aminokiselinske ostatke. Motiv Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp ponavlja se tri puta u peptidu. Osam aminokiselina na C-kraju čini klasičnu FLAG sekvencu (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).
Koja je razlika između flag-tag i 3xflag?
+
-
Flag-tag je jedan slijed od 8 aminokiselina koji se obično koristi u aplikacijama imunoprecipitacije, western blota i imunofluorescencije. Nasuprot tome, 3x Flag-tag sadrži 22 aminokiseline, što mu daje veći afinitet za anti-Flag antitijela i čini ga posebno povoljnim za radne procese pročišćavanja proteina.
Kako otopiti 3X ZASTAVICU?
+
-
Za pripremu osnovne otopine, otopite u TBS (50 mM Tris-HCl, pH 7,4, sa 150 mM NaCl) u koncentraciji od 5 mg/mL. Alikvotirajte i pohranite na –20 stupnjeva. Ne preporučuje se ponovno zamrzavanje i odmrzavanje.
Popularni tagovi: 3xflag peptid cas 402750-12-3, dobavljači, proizvođači, tvornica, veleprodaja, kupnja, cijena, rasuto, na prodaju